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        當前位置:首頁 > 產品中心 > 核酸合成與提取 > RNA提取 > AN51L518總 RNA 柱式提取試劑盒

        總 RNA 柱式提取試劑盒

        簡要描述:本試劑盒可以快速從細胞、細菌和部分動物組織中提取高質量的總 RNA,不使用酚和氯仿等有毒物質。試劑盒中裂解液(Lysis Buffer)含有強變性劑和 RNA 酶抑制劑,能夠迅速裂解樣品并失活 RNA 酶,確保操作過程中 RNA 的完整性。提取得到的總 RNA 可用于 RT-PCR、qPCR、Northern blotting、cDNA 文庫構建等多種實驗。整個提取過程僅需 10 min,操作簡單

        • 產品型號:AN51L518
        • 廠商性質:生產廠家
        • 更新時間:2024-02-19
        • 訪  問  量:155

        產品分類

        Product Category

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        詳細介紹

        品牌Life-iLab/李記生物貨號AN51L518
        規格100T供貨周期現貨
        主要用途用于部分組織類型,包括肝臟、腸、腦、脾臟和柔軟的腫瘤組織,不適用于肺、心臟、皮膚應用領域生物產業

        產品描述
        本試劑盒可以快速從細胞、細菌和部分動物組織中提取高質量的總 RNA,不使用酚和氯仿等有毒物質。試劑盒中裂解液(Lysis Buffer)含有強變性劑和 RNA 酶抑制劑,能夠迅速裂解樣品并失活 RNA 酶,確保操作過程中 RNA 的完整性。提取得到的總 RNA 可用于 RT-PCR、qPCR、Northern blotting、cDNA 文庫構建等多種實驗。整個提取過程僅需 10 min,操作簡單快速、穩定性高。本試劑盒僅適用于部分組織類型,包括肝臟、腸、腦、脾臟和柔軟的腫瘤組織,不適用于肺、心臟、皮膚、骨骼、肌肉等堅韌的組織。
        訂購信息

        產品名稱貨號規格
        總RNA柱式提取試劑盒AN51L518100T

        產品組分

        組分100T
        Lysis Buffer 60 mL
        Wash Buffer* 12 mL
        Elution Buffer 10 mL
        RNA純化柱(帶收集管) 100套

        運輸與保存
        常溫運輸。常溫保存,有效期12個月。
        使用方法
        一、 樣品裂解
        1. 貼壁培養的細胞
        (1) 移除培養基,PBS洗一次;
        (2) 在培養板中加入500 μL的Lysis Buffer (<3×10^6
        個細胞),水平放置片刻,再用槍頭吹吸或攪拌數次,直至
        細胞裂解。轉移至1.5mL離心管中,用力反復吹打數次,充分裂解直到看不到細胞團為止,然后進
        行步驟二;
        注:(1) 細胞樣品建議用6孔板或35mm培養皿培養細胞,培養至合適的密度進行 RNA提取 (24孔板培養的細
        胞培養至90%以上的細胞密度也可使用)。 (2) 不方便直接裂解的培養容器,可以使用細胞刮刮下細胞或
        者胰mei消化后,將細胞收集到離心管中。 (3) 對于T細胞/B細胞等體積很小、RNA含量很低的細胞,建
        議增加細胞數到至少1×10^6
        以上。
        2. 懸浮培養的細胞
        (1) 取1~3×106
        個細胞的懸液至1.5 mL離心管,1000 g離心1 min收集細胞;
        (2) 去上清,加入500 μL的Lysis Buffer,用力吹吸10次,vortex 10 s,保證細胞裂解,看不到細胞團,
        然后進行步驟二。
        3. 細菌細胞
        5,000 rpm離心3 min收集適量的菌體(<5×10^8
        ),棄去上清,加入100μL含有溶菌mei的TE buffer,吹打混
        勻,室溫靜置孵育數分鐘。加入500 μL的Lysis Buffer,劇烈振蕩20 s,12,000rpm離心1~2 min,取上清,然
        后進行步驟二。
        4. 動物組織(適合腸、肝、腦、脾、腫瘤,不適用肺、心、皮膚等堅硬組織)
        (1) 勻漿器勻漿:切取新鮮組織10~50mg至1.5 mL離心管中,加入500 μL的Lysis Buffer,用組織勻漿機
        勻漿組織,直至無肉眼可見的組織塊。12,000 rpm離心1~2 min。
        (2) 液氮研磨:在液氮中將10~50mg組織充分研磨,將研磨成粉的樣品轉移至離心管中,加入加入500 μL的
        Lysis Buffer,劇烈振蕩20 s,12,000rpm離心1~2 min。
        (3) 轉移不超過400μL上清至新離心管中。切勿吸取管底沉淀和泡沫。
        二、RNA提取
        1. 細胞樣品
        較精確估計裂解液體積,向細胞裂解液中加入等體積的無水乙醇,將離心管劇烈顛倒幾次,或用移液器
        用力吹吸數次,充分混勻,然后將液體轉移至離心柱上,進行步驟3?!咀ⅰ浚嚎赡軙a生沉淀,這是正?,F象
        ,不影響提取過程,繼續后續操作。
        2. 組織樣本
        較精確估計裂解液體積,向裂解液中加入0.5倍體積的無水乙醇(或等體積的70%乙醇),將離心管劇烈
        顛倒幾次,或用移液器用力吹吸數次,充分混勻,然后將液體轉移至離心柱上。
        3. 7,000 rpm離心1 min(如離心柱上仍有液體殘留可增加轉速至12,000 rpm),棄廢液。
        4. 向RNA柱中加入500 μL的Wash Buffer,12,000 rpm離心1 min。
        5. 倒掉廢液,將RNA柱裝回收集管,12,000 rpm空管離心1 min,去除殘留的Wash Buffer。
        6. 取出RNA吸附柱,放入一個RNase-free的1.5mL離心管中,開蓋晾干1 min。向RNA柱的膜中心部位加入
        25~50uL的Elution buffer,室溫靜置1 min。
        7. 12,000 rpm離心1 min。樣品可長期保存至-80℃?!咀ⅰ浚杭酉疵撘后w積不應少于25uL,否則會影響回
        收率,為了獲得更大濃度的RNA,可將離心的RNA溶液重新加入到吸附柱,重復洗脫一遍。
        注意事項
        1. 本產品僅限于科學實驗研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領域。
        2. 加入Lysis Buffer后,一定要充分振蕩,保證RNA提取的效果;如果混合液非常粘稠難以轉移,明顯樣品
        量過多,增加Lysis buffer用量或減少樣本用量。
        3. 細胞或組織裂解產物,上柱前需要加入無水乙醇,充分混勻之后加入離心柱離心。
        4. 使用的樣本避免反復凍融,以免影響RNA的產率和質量。
        5. 關于RNA純度:OD260/OD280和 OD260/OD230比值是衡量 RNA 純度的指標,高質量的RNA,
        OD260/OD280的值在1.9-2.2之間,OD260/OD230大于 1.8(比較純凈的比值大于2.0)。本試劑盒提取
        RNA,使用Nanodrop等微量分光光度計測定OD 260/280在1.90~2.2之間,OD260/230在2.0~2.2之間均屬
        正常。
        相關產品推薦
        總RNA提取試劑盒(trizol)(貨號:AN51L758)
        RNA提取輔助試劑(氯仿替代物)(貨號:AN51L677)

        本產品僅限于科學實驗研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領域。


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