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        EdU(動物注射)

        簡要描述:EdU(動物注射)可以進行高效快速的檢測出DNA復制活性,此技術廣泛應用于細胞增殖、細胞分化、生長與發育、DNA損傷修復等方面的研究。容易在細胞內擴散;無需抗原抗體反應,能在細胞和組織水平更快速便捷地反映DNA復制活性。

        • 產品型號:AC11L271/AC11L272
        • 廠商性質:生產廠家
        • 更新時間:2023-10-07
        • 訪  問  量:1332

        詳細介紹

        品牌其他品牌供貨周期現貨
        應用領域化工,生物產業,綜合

         

        EdU(動物注射)

        產品描述
        細胞增殖是評價細胞活性、代謝、生理和病理狀況的重要指標。EdU (5-Ethynyl-2`- deoxyuridine)是一種胸腺嘧啶核苷類似物,其連有的炔烴基團在天然化合物中很少見,能夠在細胞增殖時期代替胸腺嘧啶(T)摻入正在復制的DNA分子中,通過基于EdU與熒光染料的特異性共軛反應,把熒光基團標記到新合成的含有EdU的DNA上面,這樣可以進行高效快速的檢測出DNA復制活性,此技術廣泛應用于細胞增殖、細胞分化、生長與發育、DNA損傷修復等方面的研究。
        傳統的免疫熒光染色(BrdU)檢測方法需要DNA變性、抗原修復、抗原抗體過夜孵育等復雜繁瑣的操作步驟。而EdU檢測方法不需要劇烈的DNA變性,只需溫和的細胞固定化和透化處理,能夠較好地保護細胞形態、DNA整體結構及細胞內抗原識別位點,操作步驟更加快速、靈敏和準確。EdU與胸腺嘧啶(T)結構非常相似,大小卻只有BrdU抗體的1/500,很容易在細胞內擴散;無需抗原抗體反應,能在細胞和組織水平更快速便捷地反映DNA復制活性。
        本試劑適用于小鼠、大鼠及其它動物模型的各種組織器官的細胞增殖情況檢測。
        訂購信息

        產品名稱貨號規格價格
        EdU(動物注射)AC11L271
        2 mg680
        EdU  (動物注射)AC11L27210 mg1580

        產品組分

        產品組分試劑量規格
        EdU粉末2 mg20 T
        EdU粉末10 mg100 T

        運輸與保存
        常溫運輸。4℃保存,有效期12個月。
        使用方法
        本試劑盒適用于各種動物活體注射,穩定性較好。注射標記后可將目標組織制備為石蠟或冰凍切片進行EdU染色檢測。【注】:切片后可搭配EdU細胞增殖成像分析試劑盒(李記貨號:AC11L251)使用,進行后續的切片EdU染色檢測。
        動物實驗方法,以1cm×1cm切片為例
        實驗前須知:EdU的分子量為252.223,易溶于水,PBS,生理鹽水等溶液,便于動物注射使用。建議EdU的初始給藥量為5mg/kg,稀釋濃度為0.5-1mg/mL。具體動物模型的注射劑量可根據相關文獻進行調節。【注】:我們根據每只小鼠20g的體重為例,10mg EdU粉末可以注射100只小鼠(100T)。
        動物EdU注射
        【注】:①注射方式:依據實驗決定,如:腹腔注射、皮下注射、肌肉注射、尾靜脈注射等方式。
        ②標記時間:最佳標記時間依據具體實驗目的而定,增殖快速的組織及器官采用短時間標記(<12 h)(例如小腸),增殖速度慢的組織及器官可采用長時間標記(如7 d或更長時間,例如大腦)。
        ③標記濃度:最佳標記濃度依據具體實驗而定。
        ④取樣部位:根據實驗目的而定,一次標記可對多種組織和器官進行組織切片。因小腸上皮組織增殖速度較快,標記時間較短(動物注射6 d后取組織),建議預實驗可以取小腸組織檢測細胞增殖情況,作為陽性對照。
        切片處理
        1.切片前處理:組織器官先進行清洗,以去除血液、組織或器官中殘留的EdU,降低背景。
        2.切片厚度:3-10um為宜,切片過厚可能影響切片背景。
        3.切片后處理:①石蠟切片脫蠟:二甲苯洗脫3次,每次10 min,乙醇梯度(100%,95%,85%,75%)脫水各1次,去離子水洗脫1次。②冰凍切片處理:室溫放置30 min后,4℃丙酮固定10 min,PBS清洗3次,每次5 min。
        4.2mg/mL 甘.an.suan清洗切片10 min。
        5.加入100uL 0.5% Triton X-100細胞通透劑,室溫孵育10 min,再用PBS清洗1次。
        后續進行EdU染色步驟需要搭配EdU細胞增殖成像分析試劑盒(李記貨號:AC11L251)進行以下步驟:
        EdU染色
        1.通過用10:1去離子水稀釋反應緩沖液,進行配制1×反應緩沖液。
        2.按照溶解200 mg緩沖添加劑溶于1 mL 去離子水的比例稱取適量的粉末進行溶解,即為可用的緩沖添加劑的濃度,建議現用現配。
        【注】:緩沖添加劑為白色粉末,較難準確稱量,稱量范圍可稍微放寬,但是不應超過±20%,且該粉末較易氧化,使用后請旋緊管蓋,如試劑出現棕黃色,則需報廢或更換。
        3.按照以下的表格進行染色反應液的配制:

        染色反應液組分500 μL1 mL2 mL5 mL
        1X反應緩沖液430 μL860 μL1.8 mL4.3 mL
        催化劑溶液20 μL40μL80 μL200 μL
        TAMRA紅色熒光溶液1.2 μL2.5 μL5 μL12.5 μL
        緩沖添加劑50 μL100 μL200 μL500 μL

        4.加入以上配置好的檢測混合液,以覆蓋組織為宜,避光、室溫孵育30 min。
        5.棄染色反應液,加入300 μL 0.5% Triton X-100細胞滲透液清洗2-3次,每次10 min。
        6.棄細胞滲透液,用PBS洗兩次,每次 5 min。
        其它染色(自備)
        (可選)可以根據實驗需要進行細胞表面或細胞內抗原的抗體染色。
        DNA染色
        1.將Hoechst 33342 *超級純*(李記貨號:AC12L021)PBS溶液1:1000進行稀釋得到1×Hoechst染色液。
        2.加入150 μL 1×Hoechst染色液,室溫避光孵育10-15 min后,棄染色液。
        3.PBS清洗細胞2-3次,去掉洗液。
        圖像獲取及分析
          建議染色完成后立即進行熒光顯微鏡拍照觀察;如果條件限制,請于4℃條件下避光濕潤保存3 d之內完成拍照??墒褂每篃晒獯銣绶馄瑒┻M行封片后于4℃條件下保存及拍照檢測。

        熒光染料最大激發波長最大發射波長熒光顏色
        TAMRA541 nm567 nm橘紅色熒光
        Hoechst 33342350 nm461 nm藍色熒光

        注意事項
        1.本產品僅限于科學實驗研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領域。
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