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        當前位置:首頁 > 產品中心 > PCR&q-PCR > 核酸定量測定 > AN54L038/AN54L039Pikogreen dsDNA定量試劑盒(超敏)

        Pikogreen dsDNA定量試劑盒(超敏)

        簡要描述:Pikogreen dsDNA定量試劑盒(超敏)不同于常規的基于吸光度的測量,這款試劑盒可以區分dsDNA、ssDNA或RNA,有選擇性地檢測dsDNA(見圖1)。與傳統DNA定量方法相比,該產品具有檢測范圍廣、高靈敏度、高特異性等優點。

        • 產品型號:AN54L038/AN54L039
        • 廠商性質:生產廠家
        • 更新時間:2023-10-11
        • 訪  問  量:2122

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        詳細介紹

        品牌其他品牌貨號AN54L038/AN54L039
        規格200 assays供貨周期現貨
        應用領域生物產業

        Pikogreen dsDNA定量試劑盒 (超敏)

        產品描述
          Pikogreen dsDNA 定量試劑盒(Pikogreen HighSensitivity dsDNA Quantitation Kit不同于常規的基于吸光度的測量,這款試劑盒可以區分dsDNA、ssDNARNA,有選擇性地檢測dsDNA(見圖1)。與傳統DNA定量方法相比,該產品具有檢測范圍廣、高靈敏度、高特異性等優點。試劑盒主要包含Pikogreen High Sensitivity dsDNA Quantitation Buffer, Enhancer solution以及pre-diluted dsDNA Standards三個組分,可以在200 uL體系內定量0.2~100 ng的dsDNA(見圖2)。此外,試劑盒還可以將其他污染物的影響降低至最小,可以耐受常規污染物例如蛋白質,鹽,有機溶劑和洗滌劑等(見表1),試劑盒不具有細胞膜通透性,沒有細胞毒性和誘發突變性,對人體安全無害。
        訂購信息

        產品名稱貨號規格
        Pikogreen dsDNA定量試劑盒(超敏)AN54L038200 assays
        Pikogreen dsDNA定量試劑盒(超敏)AN54L0391000 assays

        產品組分

        組分AN54L038AN54L039
        A: Pikogreen High Sensitivity dsDNA Quantitation Solution50 mL250 mL
        B: Pikogreen High Sensitivity dsDNA Enhancer, 100×0.5 mL2.5 mL
        C: dsDNA Standards 0 , 0.5, 1, 2 ,4 ,6, 8 and 10 ng/uL dsDNA from calf thymus每組 0.1 mL8組)每組 0.5 mL8組)


        運輸與保存
        藍冰運輸。4℃避光保存,有效期24個月。
        使用方法

        1. 使用前,將產品從儲存條件下取出恢復至室溫。如果100XEnchancer儲存液出現沉淀,可37℃水浴溶解。每個組分應充分震蕩或渦旋混勻、離心,以免造成不必要的試劑損耗。

        2. 每個待測樣品對應200 μL的Pikogreen工作液。對于一個96孔板,吸取200 μL 100X Enchancer,加入到20 mL Quantitation Solution 中,渦旋混勻,配置成Pikogreen工作液,為得到最佳結果,工作液應在1 h內使用完畢。如果將工作液重新儲存并在24 h內使用,結果的準確性會有輕微損失。儲存過程中,增強液可能會出現沉淀現象,可以通過渦旋震蕩使其重懸。

        3. 對于每個樣品,吸取200 μL的工作液至黑色的96孔板微孔中。為確保結果精確可靠,建議每個測試樣品和DNA標樣分別做平行的3個復孔,此過程也可以使用有精確量程的移液排槍進行。黑色的檢測板可以減少各測試樣品間的熒光干擾。

        4. 在96孔板微孔中,每孔加入10 μL的dsDNA標樣或未知樣品,并用移液器輕輕混勻。

        5. 將微孔板室溫避光孵育5~10 min,為得到最佳結果,孵育結束后,應立即讀取檢測板。也可以在6 h內讀取數據,但結果的精確性會有輕微損失。

        6. 使用激發波長和發射波長在485 nm和530 nm處的酶標儀測量熒光值。

        7. 制作一條標準曲線,計算檢測樣品的DNA濃度(見圖2)。
          】:圖2標準曲線僅供參考,您可以根據實際測得的數據自制標準曲線,從而求算樣品的濃度。

        圖1:使用Pikogreen High Sensitivity dsDNA 定量試劑盒檢測不同類型核酸得到的相對熒光強度


        圖2:使用Pikogreen Hig Sensitivity dsDNA 定量試劑盒制作的calf thymus DNA標準曲線(Ex/Em 485/530),左上角插圖顯示了低濃度DNA樣本測定的曲線圖。

        注意事項

        1. 對于要檢測的植物或動物來源的DNA樣本,小牛胸腺DNA(Calf thymus DNA )常常作為制作DNA標樣的參照物。因為Calf thymus DNA具有雙鏈結構、高度聚合,堿基分配均勻(AT含量58%,GC42%)。如果檢測樣品的熒光值超過了標準曲線,那么需要將樣品做進一步稀釋處理。為了保持結果的一致性,務必使每孔上樣量均等,且不含有其他高濃度的污染物。
          2. Pikogreen High Sensitivity dsDNA 定量試劑盒可以測量范圍在0.2~100 ng的dsDNA。對于一些不需要線性檢測的樣品,試劑盒檢測范圍可以擴展至200 ng。如需檢測更低含量的樣品,您可以將DNA標樣用1×TE緩沖液作進一步的稀釋,濃度可以稀釋到0.02 ng/μL,然后按照常規程序每孔10 μL上樣。
          3. 對于不同種類的檢測儀器,您可以優化儀器設置,以獲取最佳線性度。一些可能會影響最終線性度和相對熒光強度的因素有:(1)激發和發射波長與帶寬(2)截止型濾波器(3)靈敏度設置(4)移液的準確性(5)微孔板制造商。為了得到最佳結果,請使用精確校準的移液器和去RNA酶的槍頭、試管以及檢測板。建議檢測時每個DNA標樣和未知樣品都設定3個復孔。如果檢測時不只一塊96孔板,建議每塊96孔板都設定一條標準曲線,盡量減少檢測板之間的誤差。
          1:常見的DNA污染物對 Pikogreen High Sensitivity dsDNA 定量試劑盒的影響

        復合物初始濃度終濃度(200 μL結果
        醋酸銨100 mM5 mMPass
        醋酸鈉600 mM30 mMPass
        氯化鈉200 mM10 mMPass
        氯化鎂25 mM1.25 mMPass
        苯*2 %0.1 %Pass
        乙醇10 %0.5 %Pass
        氯仿2 %0.1 %Pass
        十二烷基硫酸鈉(SDS)0.2 %0.01 %Pass
        Triton X-1000.2 %0.01 %Pass
        牛血清白蛋白(BSA)200 mg/mL10 mg/mLPass*
        dNTPs**2 mM100 μMPass
        聚乙二醇40 %2 %Pass
        瓊脂糖2 %0.1 %Pass

        】:3dsDNA平行樣品的標準曲線,分別在上述含有特定濃度污染物的條件下(初始濃度進行檢測,“Pass"指與沒有污染物的體系相比較,實驗結果變化范圍<20%。所有樣品用Molecular DevicesGemini XS酶標儀在485 nm處激發,在530 nm處測熒光強度?!?/span>Pass *"指由此條件測得的標準曲線有少許變動。dNTPs**"指dATP, dCTP, dGTP, dTTP的混合物。




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